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小鼠單核巨噬細胞凍存方法的優(yōu)化與應用
小鼠單核巨噬細胞凍存方法的優(yōu)化與應用
更新時間:2023-08-18 | 點擊率:554
單核巨噬細胞是人體內重要的免疫細胞,在抵御病原體、清除細胞碎片和組織修復中發(fā)揮著關鍵作用。
小鼠單核巨噬細胞
的研究在生物醫(yī)學領域中被廣泛運用,包括疾病模型的建立、藥物篩選以及免疫調節(jié)機制的研究等。然而,由于單核巨噬細胞的稀缺性和短暫的生命周期,如何有效地保存這些細胞就成為了研究者們關注的焦點。
1、主要試劑與儀器
主要試劑包括DMEM培養(yǎng)基、FBS、DMSO、青霉素-鏈霉素溶液等。儀器包括細胞培養(yǎng)箱、低溫冰箱、離心機、細胞計數(shù)板等。
2、小鼠單核巨噬細胞凍存步驟
?。?)單核巨噬細胞的分離與純化:采用頸部淋巴結或腹腔穿刺法收集單核巨噬細胞,通過密度梯度離心法進行純化。
?。?)細胞凍存液的準備:將DMEM培養(yǎng)基與FBS按照一定比例混合,加入適量DMSO,使其終濃度為5%。
(3)細胞凍存:將純化的單核巨噬細胞用凍存液重懸,調整細胞密度為5×10^6個/ml,迅速轉移至凍存管中。
?。?)凍存與復蘇:將凍存管放入-80℃冰箱中,48小時后轉移至液氮中長期保存。細胞復蘇時,從液氮中取出凍存管,迅速轉移至37℃水浴中解凍。
這種高效、簡便的小鼠單核巨噬細胞凍存方法通過優(yōu)化凍存液組成、細胞密度以及凍存與復蘇過程,顯著提高了細胞的存活率和活性。這將為廣大研究者提供一種可靠的實驗手段,有助于單核巨噬細胞在免疫學、藥理學和疾病模型研究中的應用。
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