常溫運輸過程中,細胞不免受到震蕩和溫度變化的影響,出現(xiàn)皺縮、聚團甚至脫落的現(xiàn)象。遇到這種情況,不用緊張,只要正確處理,細胞就能恢復(fù)正常生長。
收貨時皺縮
常溫細胞收貨后,把細胞放進細胞培養(yǎng)箱靜置2-4小時即可。如果4小時后細胞仍然沒有鋪展開,密度適中的前提下可以靜置過夜(過夜前倒出部分培養(yǎng)基,留5-10mL在瓶中,瓶蓋擰松)。
收貨時聚團
常溫細胞收貨后,先把細胞放進細胞培養(yǎng)箱靜置2-4小時以穩(wěn)定狀態(tài),再進行傳代。傳代用含EDTA的0.25%胰蛋白酶消化1-3min左右。
收貨時脫落
常溫細胞收貨后,先把細胞放進細胞培養(yǎng)箱靜置2-4小時以穩(wěn)定狀態(tài)再處理。脫落后的細胞通常聚團漂浮,通過離心將漂浮的細胞團收集起來,在離心管里進行胰酶消化后重新鋪板即可。
貼壁細胞常規(guī)方法消化下來,和處理好的脫落細胞合并,混勻后鋪板。
SH-SY5Y脫落處理步驟:
1. 1200rpm(約250g)3min離心收集細胞,去除舊培養(yǎng)基;
2. PBS 重懸細胞,再次 1200rpm(約250g)3min離心,去除PBS;
3. 加入 1mL左右 0.25%胰酶重懸細胞,吹打1-2下吹起沉淀即可;
4. 放入細胞培養(yǎng)箱約 1-3min;
5. 用移液槍輕輕吹打細胞懸液,使細胞團分散;
6. 迅速加入 3-5mL含血清的培養(yǎng)基混勻以終止消化;
7. 1200rpm(約250g)3min離心,去除胰酶;
8. 加入新鮮培養(yǎng)基按合適比例接入無菌培養(yǎng)器皿中;
SH-SY5Y細胞收貨時皺縮、脫落
SH-SY5Y細胞處理后第三天